Tampon Çözelti Hazırlanması

[aquahell]

04. Değişik
Derişimlerde Tampon Hazırlanması


04.01. 100 mM
pH= 2 Sodyum Fosfat Tamponu Hazırlanması

7.8 g (50 mmol) NaH₂PO₄ .2H₂O (sodyum
dihidrojenfosfat) bir miktar saf su içerisinde çözülür. Üzerine derişik %
85'lik H₃PO₄' den 3.4 mL (50 mmol) eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.02. 10 mM
pH= 2.6 Sodyum Fosfat Tamponu Hazırlanması

0.78 g (5 mmol) NaH₂PO₄ .2H₂O
(sodyumdihidrojenfosfat) bir miktar saf su içerisinde çözülür. Üzerine
derişik % 85'lik H₃PO₄' den 0.34 mL (5 mmol) eklenerek
son hacim 1 L'ye
tamamlanır.


04.03. 50 mM
pH= 2.8 Sodyum Fosfat Tamponu Hazırlanması

6.24 g (40 mmol) NaH₂PO₄ .2H₂O (sodyum
dihidrojenfosfat) bir miktar saf su içerisinde çözülür. Üzerine derişik %
85'lik H₃PO₄' den 0.68 mL (10 mmol) eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.04. 10 mM
pH= 3.0 SodyumTartarat Tamponu Hazırlanması

1.13 g (7.5 mmol) tartarik asit bir miktar saf su içerisinde çözülür.
Üzerine 0.58 g
(2.5 mmol) sodyum tartarat .2H₂O eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.05. 20 mM
pH= 3.1 Sodyum Sitrat Tamponu Hazırlanması

3.51 g (16.7 mmol) sitrik asit.H₂O bir miktar saf su içerisinde çözülür.
Üzerine 0.97 g
(3.3 mmol) sodyum sitrat .2H₂O eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.06. 10 mM
pH= 4.3 SodyumTartarat Tamponu Hazırlanması

0.375 g (2.5 mmol) tartarik asit bir miktar saf su içerisinde çözülür.
Üzerine 1.726 g
(7.5 mmol) sodyum tartarat .2H₂O eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.07. 20 mM
pH= 4.5 Sodyum Sitrat Tamponu Hazırlanması

2.1 g (10 mmol) sitrik asit.H₂O bir miktar saf su içerisinde
çözülür. Üzerine 2.94 g
(10 mmol) sodyum sitrat .2H₂O eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.
04.08.10 mM pH= 4.7 Sodyum Asetat Tamponu Hazırlanması

0.680 g (5 mmol) sodyum asetat.3H₂O bir miktar saf su içerisinde
çözülür. Üzerine %99.5'lik glacial asetik asitten 0.287 mL (5mmol)
eklenerek son hacim 1 L'ye
tamamlanır.

04.09. 100 mM
pH= 6.8 Sodyum Fosfat Tamponu Hazırlanması

7.8 g (50 mmol) NaH₂PO₄ .2H₂O (sodyum
dihidrojenfosfat) bir miktar saf su içerisinde çözülür. Üzerine 17.9 g (50 mmol) Na₂HPO₄
.12H₂O (sodyum hidrojenfosfat) eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.


04.10. 10 mM
pH= 7.0 Sodyum Fosfat Tamponu Hazırlanması

0.78 g (5 mmol) NaH₂PO₄ .2H₂O (sodyum
dihidrojenfosfat) bir miktar saf su içerisinde çözülür. Üzerine 1.79 g (5 mmol) Na₂HPO₄
.12H₂O (sodyum hidrojenfosfat) eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.11. 100 mM
pH= 9.2 Sodyum Borat Tamponu Hazırlanması

6.18 g (100 mmol) borik asit bir miktar saf su içerisinde çözülür.
Üzerine 2.00 g
(50 mmol) sodyum hidroksit eklenerek son hacim 1 L'ye tamamlanır.

04.12. 20 mM
pH= 9.6 Etanolamin Asetat Tamponu Hazırlanması

Yoğunluğu 1.017 g/mL olan etilenaminden 1.22 mL (20 mmol) ve %99.5'lik glacial
asetik asitten 0.575 mL (10 mmol) karıştırılarak son hacim 1 L'ye tamamlanır.

[aquahell]

Gerekli
Çözelitiler

Çözelti A : 0.1 N HCl asit çözeltisi (8.1 mL derişik HCl asit
çözeltisi alınarak son hacmi 1 L'
ye tamamlanır.)

Çözelti B: 0.1 N NH₂CH₂COOH (7.507 g glycocoll ve 5.85 g NaCl bir miktar saf
suda çözdürülerek son çözelti hacmi 1
L' ye tamamlanır.)

Çözelti C: 0.2
M KHC₈H₄O₄ (40.846 g potasyum
hidrojenftalat bir miktar saf suda çözdürülerek son çözelti hacmi 1 L' ye tamamlanır.)

Çözelti D: 0.1
M Sodyum sitrat (21.014 g sitrik asit.H₂O
üzerine 200 mL 1 N NaOH çözeltisi eklenir . Son hacim 1 L'ye saf su ile tamamlanır.)

Çözelti E: 0.1 N NaOH çözeltisi ( 0.4 g sodyum hidroksit
çözeltisi bir miktar saf suda çözüldükten sonra son hacim 1 L' ye tamamlanır.)

Çözelti F: 0.067
M KH₂PO₄ ( 9.073 g potasyum
dihidrojenfosfat bir miktar saf suda çözdürülerek son çözelti hacmi 1 L' ye tamamlanır.)

Çözelti G: 0.067
M Na₂HPO₄ ( 11.866 g sodyum
hidrojenfosfat bir miktar saf suda çözdürülerek son çözelti hacmi 1 L' ye tamamlanır.)

Çözelti H: 0.05
M sodyum tetraborat ( 12.367 g H₃BO₃
üzerine 100 mL 1 N NaOH çözeltisi eklenir . Son hacim 1 L'ye saf su ile tamamlanır.)

[aquahell]

Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 1.10-3.50 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 1.10-4.96 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 2.20-3.80 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 4.00-6.20 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 4.96-6.69 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 4.80-8.00 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 7.71-9.23 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 9.23-11.02 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

pH 8.53-12.90 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması

Değişik Derişimlerde Tampon Hazırlanması

Biyolojik Tampon Çözeltileri

[aquahell]

Biyolojik Tampon Çözeltileri
Çift yüklü tamponların, biyolojik moleküllerle uyumu, Good ve arkadaşları
tarafından çeşitli çalışmalarla kanıtlanmıştır.'Good' tampon çözeltilerinin,
fosfat-, tris-, borat- ve karbonat- tamponlarına göre avantajları fazladır. Bu
avantajlar;

• pKα değerlerinin pH 6.0 ve
  9.0 arasında olması,
  
• pKα değerlerinin sıcaklık
  ve derişimden bağımsız olmasıdır.
  

Bütün bu bileşikler kimyasal olarak kararlıdır, toksik değildir ve biyokimyasal
reaksiyonlarda girişim yapmazlar. Hücre membranından absorbe edilmediğinden
dolayı hücre gelişimi amacıyla kullanıma uygundur. Aynı zamanda 240-700 nm
dalgaboyu arasındaki absorpsiyonu da minimum düzeydedir.

05.01. Tampon Çözelti Hazırlarken Dikkat Edilecek Kurallar

Bir tampon çözeltinin yaklaşık %99'unu su oluşturmaktadır. Bu nedenle
kullanılan suyun kalitesi ve güvenilirliği çok önemlidir. Kullanılacak suyun
çift destile olması ve kullanılmadan önce ultrafiltre edilmesi tavsiye
edilir.
Deney sırasında kullanılacak olan tampon çözeltinin sıcaklığı ve konsantrasyonu
not edilmeli, daha sonraki denemelerde de aynı parametrelerin geçerli
olduğundan emin olunmalı. Stok çözelti ile çalışırken, mutlaka çözelti seyreltildikten
ve sıcaklık ayarlaması yapıldıktan sonra pH'sı ayarlanmadır. Stok
çözeltilerde gözle görülebilen bir bulanıklık olup oladığına dikkat
edilmelidir. Bu bulanıklık bir mikrobiyal kontaminasyon veya ortamdaki tuzların
çökmesi sonucunda oluşabilir. Çözeltiler serin bir yerde ve ağzı sıkıca
kapatılarak muhafaza edilmelidir.
Seçilecek tamponun pKα değeri çalışma pH değerine yakın olmalıdır. Deney
süresince pH nın düşeceği düşünülüyorsa pKα değeri çalışma pH değerinin çok az
altında olan bir tampon seçilmedir. pH nın artacağı düşünülüyorsa bu sefer tam
tersi durum söz konusudur (tamponun pKα sı çalışma pH değerinin biraz
üzerinde).
Bazı durumlarda biyolojik sistemler üzerine, örneğin sodyum yada potasyum
iyonlarının etkisini kontrol etmek için mineral katyonları içermeyen
tamponların hazırlanması gerekli olabilir. Bu durumda pH değerinin
ayarlanmasında NaOH veya KOH yerine quarterner organik tetrametilamonyum
hidroksit çözeltisi kullanılabilir.
Fosfat Tamponları
Fosfat tamponu ideal bir tampon olup bir çok uygulamada kullanılmaktadır. Ancak
aktif bir bileşen olduğu için birçok biyolojik reaksiyonlarda inhibitör,
metabolit, aktivatör olarak etki etmesi olumsuzluk yaratır. Çok değerlikli
katyonları bağlar veya çöktürür. Tamponlama kapasitesi, literatürde bir çok
çalışmada pH 5.8-8.0 aralığında gösterilmesine karşın, pH 7.5'un altında
zayıftır (Sørensen, S.P.L.: Biochem Z. 21, 131 (1909) and Biochem. Z. 22, 352
(1909)).